血細(xì)胞分析技術(shù)已經(jīng)進(jìn)入自動(dòng)化時(shí)代,而具有白細(xì)胞五分類或更多分析參數(shù)的儀器也普遍的應(yīng)用于國內(nèi)各級(jí)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中,為臨床診斷和治療服務(wù)。而具有18項(xiàng)參數(shù)帶有白細(xì)胞三分群功能的血細(xì)胞分析儀也已經(jīng)普及進(jìn)入到基層醫(yī)院和社區(qū)醫(yī)療中心,在許多大型醫(yī)院中已不占主流位置,因此可以說目前在較大醫(yī)院的檢驗(yàn)科,常規(guī)血細(xì)胞分析儀已經(jīng)進(jìn)入全自動(dòng)化和白細(xì)胞五分類的時(shí)代。
本文主要介紹全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀在白細(xì)胞五分類上的原理和散點(diǎn)圖分布特點(diǎn)。此類儀器在紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板和計(jì)算參數(shù)上一般會(huì)采用類似的測定原理和計(jì)算方法,此類儀器的進(jìn)展和其功能特點(diǎn)可參考作者撰寫的其它文章(見參考文獻(xiàn))。具有白細(xì)胞五分類功能的血細(xì)胞分析儀器是指通過各種物理和化學(xué)技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分析,以獲得外周血液中白細(xì)胞的五種常見類型,嗜中性粒細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞,嗜堿性粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的百分率和絕對(duì)值的測定結(jié)果,此外還應(yīng)該具有對(duì)出現(xiàn)異常白細(xì)胞的提示或初步分類功能。
目前國內(nèi)外具有開發(fā)研制白細(xì)胞五分類法儀器的主要為歐美和日本生產(chǎn)廠商,比較著名的歐美廠家有Beckman-Coulter;ABBOTT;Siemens(Bayer);ABX;日本有Sysmex和Nihon Kohdon。在國內(nèi)已經(jīng)有邁瑞(MINDRAY)公司生產(chǎn)幾個(gè)型號(hào)的五分類血細(xì)胞分析儀器投入醫(yī)療市場。
一 簡要發(fā)展史
1974年,一種名為HEMALOG D的具有初步白細(xì)胞分類功能的白細(xì)胞分析儀問世。
1982年,Technicon公司生產(chǎn)了H6000型血液細(xì)胞分析儀器,應(yīng)該是首款具有白細(xì)胞五分類能力的儀器。同時(shí)代日本日立公司推出圖像分析法的白細(xì)胞分析儀HITACHI 8200型,僅僅是用于完成白細(xì)胞血片分類的儀器,沒有其他血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析能力。
Technicon 公司1985 年開發(fā)了比較成熟的具有白細(xì)胞五分類功能的Technicon H1 型血液細(xì)胞分析儀,隨后升級(jí)為H2型和H3型。
COULTER公司在1987 年開發(fā)研制其經(jīng)典VCS技術(shù),并推出持續(xù)具有多年影響力的、具有白細(xì)胞五分類功能的血液細(xì)胞分析儀MAXM 型。
1990年前后,歐洲和日本許多廠家都陸續(xù)推出了各種類型的具有白細(xì)胞五分類功能的血細(xì)胞分析儀器。各廠家設(shè)計(jì)生產(chǎn)的此類血細(xì)胞分析儀,其在白細(xì)胞分類技術(shù)上原理各不相同,分析測定項(xiàng)目略有不同,且形式多樣,結(jié)構(gòu)復(fù)雜,試劑種類和成分也趨于復(fù)雜。不斷改進(jìn)和升級(jí)的新產(chǎn)品使得儀器在白細(xì)胞分類技術(shù)上更加成熟和可靠。而技術(shù)的提高也帶來了儀器和消耗品(試劑)價(jià)格的增加。
二 儀器原理和散點(diǎn)圖特點(diǎn)
1 體積、電導(dǎo)和激光散射原理
這是Beckman-Coulter公司生產(chǎn)的血細(xì)胞分析儀所采用的經(jīng)典分析方法,他集三種物理學(xué)檢測技術(shù)于一體,在細(xì)胞處于自然原始的狀態(tài)下對(duì)其進(jìn)行多參數(shù)分析。該方法也稱為體積、電導(dǎo)、激光散射血細(xì)胞分析法。此技術(shù)采用在標(biāo)本中首先加入紅細(xì)胞溶血?jiǎng)┤芙獾艏t細(xì)胞,然后加入穩(wěn)定劑來中和紅細(xì)胞溶解劑的作用,使白細(xì)胞表面、胞漿和細(xì)胞體積保持穩(wěn)定不變。然后應(yīng)用鞘流技術(shù)將細(xì)胞推進(jìn)到流動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)池(Flowcell)中,接受儀器VCS三種技術(shù)的檢測。
V代表體積(Volume)測量法,是采用經(jīng)典的庫爾特專利技術(shù),用低頻電流準(zhǔn)確分析細(xì)胞體積。體積是區(qū)分白細(xì)胞亞群的一個(gè)重要的參數(shù),它可有效區(qū)分體積大小差異顯著的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。C代表高頻電導(dǎo)性(Conductivity),采用高頻電磁探針原理測量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)間的差異,也是該公司的專利技術(shù)。細(xì)胞膜對(duì)高頻電流具有傳導(dǎo)性,當(dāng)電流通過細(xì)胞時(shí),細(xì)胞核的化學(xué)組份可使電流的傳導(dǎo)性產(chǎn)生變化,其變化量可以反映出細(xì)胞內(nèi)含物的信息。該參數(shù)可用來區(qū)分體積相近而內(nèi)部性質(zhì)不同的細(xì)胞群體,如淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞,由于它們的細(xì)胞核特性不同而在傳導(dǎo)性參數(shù)上有所區(qū)別。S代表激光散射(Scatter)測量技術(shù),采用氦氖激光源發(fā)出的單色激光掃描每個(gè)細(xì)胞,收集細(xì)胞在10°~70°角度內(nèi)出現(xiàn)的散射光 (MALS)信號(hào)。該激光束可穿透細(xì)胞,探測細(xì)胞內(nèi)核分葉狀況和胞漿中的顆粒情況,提供有關(guān)細(xì)胞顆粒性的信息,可以區(qū)分出顆粒特性不同的細(xì)胞群體。例如細(xì)胞內(nèi)顆粒粗的要比顆粒細(xì)的散射光更強(qiáng),因此可以用于區(qū)分粒細(xì)胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜堿性三種細(xì)胞。
圖1 VCS法的測定原理
儀器將分析每個(gè)細(xì)胞在V、C、S 三種檢測技術(shù)上的測量結(jié)果,因?yàn)椴煌悇e的細(xì)胞會(huì)在體積、表面特征、內(nèi)部結(jié)構(gòu)等方面呈現(xiàn)明顯的不同。將這些特征性信息被定義到以VCS為三維坐標(biāo)(分辨率為256×256×256=16,777,216)所形成的立體散點(diǎn)圖中,這五類細(xì)胞可在三維空間中形成特定的細(xì)胞群。通過計(jì)算某群細(xì)胞數(shù)量占白細(xì)胞總數(shù)的百分比,即可得到五項(xiàng)白細(xì)胞分類結(jié)果。儀器不僅僅做出對(duì)正常白細(xì)胞的五項(xiàng)分類結(jié)果,給出典型的散點(diǎn)圖型,還可以提示許多異常細(xì)胞區(qū)域的報(bào)警。
VCS技術(shù)可通過DF1、DF2、DF3三個(gè)散點(diǎn)圖將五種類型白細(xì)胞明顯區(qū)分開。三個(gè)散點(diǎn)圖的縱坐標(biāo)均定義為細(xì)胞體積。DF1為細(xì)胞體積和激光散射的直方圖,DF2和DF3為細(xì)胞體積和高頻電導(dǎo)性的直方圖,DF3為除去粒細(xì)胞群體后顯示出淋巴細(xì)胞后面的嗜堿性粒細(xì)胞圖像。
圖2 各類白細(xì)胞在VCS三維空間中的分布特點(diǎn)
圖3 各類白細(xì)胞在散點(diǎn)圖中的分布特點(diǎn)
VCS技術(shù)是Beckman-Coulter公司開發(fā)研制的經(jīng)典專有方法,到目前為止的各種高檔血細(xì)胞分析儀均采用該方法對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分析。該方法在白細(xì)胞分析上尚有特殊能力,例如可以測定和分析中性粒細(xì)胞的體積、核漿比例、細(xì)胞顆粒特性等參數(shù),也就是將中性粒細(xì)胞的VCS三個(gè)參數(shù)分別給出,用于了解細(xì)菌感性疾病與其它疾病的區(qū)別。也可對(duì)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等均作出其細(xì)胞群體的三個(gè)技術(shù)參數(shù)值,是比較有前景的研究內(nèi)容。
儀器在RBC、PLT、WBC計(jì)數(shù)上依然采用電阻抗法,血紅蛋白仍然采用比色法測定。該公司的五分類法血細(xì)胞分析儀先后推出多種類型,如MAXM、STKS、GEN·S、HmX、LH755和最新的LH780等型號(hào),在某些機(jī)型還具有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析功能和T淋巴細(xì)胞亞群分析功能。
2. 電阻抗、射頻和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
日本Sysmex公司系列血細(xì)胞分析儀是在國內(nèi)應(yīng)用非常廣泛的儀器,從三分類法到五分類法的各種型號(hào)儀器都有大量用戶。其儀器型號(hào)種類豐富,功能和測定參數(shù)各異,其各種儀器間均有近似的檢測原理,但在結(jié)合特定的功能以達(dá)到不同的分析目的方面,其原理和所用試劑又有不完全相同之處。本文以目前其最高配置的XE-2100型血細(xì)胞分析儀為例說明其在白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類方面的原理和特點(diǎn)。
Sysmex XE-2100在白細(xì)胞分類上采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合核酸熒光染色技術(shù)進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類。半導(dǎo)體激光照射在通過鞘流技術(shù)處理的細(xì)胞上,可根據(jù)每個(gè)細(xì)胞所產(chǎn)生的三種信號(hào)來鑒別細(xì)胞類別。前向散射光(FSC)信號(hào)可反應(yīng)細(xì)胞體積大?。粋?cè)向散射光(SSC)信號(hào)可反應(yīng)細(xì)胞的顆粒和細(xì)胞核等內(nèi)含物的信息;側(cè)向熒光(SFL)強(qiáng)度信號(hào)則用于分析細(xì)胞內(nèi)脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的含量。
在白細(xì)胞分析上主要采用兩個(gè)通道進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類,兩個(gè)通道均采用激光和鞘流進(jìn)樣的方式測定。DIFF通道: STROMATOLYSER-4DL試劑中的表面活性劑可以溶解掉標(biāo)本中的紅細(xì)胞和血小板,并在白細(xì)胞膜上打出小孔;然后第二種試劑 STROMATOLYSER-4DS中的聚次甲基染料通過這個(gè)小孔進(jìn)入白細(xì)胞中,與細(xì)胞核的核酸和細(xì)胞器結(jié)合,在經(jīng)過波長633nm的激光照射,產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與細(xì)胞的核酸含量成正比。STROMATOLYSER -4DL試劑還具有與嗜酸性顆粒特異性結(jié)合的能力,可根據(jù)側(cè)向散射光信號(hào)強(qiáng)度,將嗜酸性粒細(xì)胞從中性粒細(xì)胞中分離出來。這樣可以將中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞清楚的分離開。在DIFF散射圖當(dāng)中可以得到白細(xì)胞的四個(gè)分群(LMNE)。
WBC/BASO通道是專用作檢測嗜堿性粒細(xì)胞的通道,因?yàn)槭葔A性粒細(xì)胞數(shù)量非常少,因此必須采用特殊技術(shù)處理。STROMATOLYSER –FB是一種酸性試劑,可將紅細(xì)胞和血小板形成淡影化,將除嗜堿性粒細(xì)胞以外的白細(xì)胞處理成裸核形態(tài),然后采用前向散射光(FSC)信號(hào)和側(cè)向散射光(SSC)信號(hào)使嗜堿性粒細(xì)胞從其它細(xì)胞中分離出來。前向散射光與細(xì)胞體積測定相關(guān),側(cè)向散射光與裸核后的細(xì)胞結(jié)構(gòu)復(fù)雜性有關(guān)。在這個(gè)通道中可以獲得白細(xì)胞總數(shù)和嗜堿性粒細(xì)胞的數(shù)量。
圖4 Sysmex XE-2100白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖
儀器在幼稚粒細(xì)胞分析上有特殊的IMI通道,在IMI檢測通道中主要應(yīng)用射頻(RF)技術(shù)和直流電阻抗法(DC)。這個(gè)測定通道根據(jù)幼稚細(xì)胞膜表面比成熟細(xì)胞膜表面含有脂質(zhì)少的現(xiàn)象,在稀釋液中加入硫化氨基酸(IM試劑),由于占位不同,結(jié)合在幼稚細(xì)胞表面的氨基酸較多,對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?,?duì)幼稚細(xì)胞具有保護(hù)作用。當(dāng)加入溶血?jiǎng)┖蟪墒旒?xì)胞易被溶解掉,而幼稚細(xì)胞不易被溶解破壞,可通過電阻法檢測出來。射頻技術(shù)用于測量細(xì)胞核的大小和顆粒的多少,而直流電信號(hào)可反應(yīng)出細(xì)胞體積的大小。
在有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)上通過專門的有核紅細(xì)胞檢測程序和專用通道-NRBC通道,在處理標(biāo)本時(shí)加入STROMATOLYSER-NR專用試劑,它能使成熟紅細(xì)胞溶解又可保持有核紅細(xì)胞的核結(jié)構(gòu),同時(shí)也將白細(xì)胞保持完好。STROMATOLYSER-NR試劑中的聚次甲基熒光染料可滲透進(jìn)入白細(xì)胞膜內(nèi),將白細(xì)胞和有核紅細(xì)胞的核染色。通過檢測熒光強(qiáng)度得到:白細(xì)胞核大熒光強(qiáng)度高,有核紅細(xì)胞核小,熒光強(qiáng)度低,正常紅細(xì)胞無細(xì)胞核和破碎,熒光強(qiáng)度極低。根據(jù)熒光強(qiáng)度差和前向散射光信號(hào)測定的細(xì)胞體積差,可將有核紅細(xì)胞從其他細(xì)胞群中區(qū)分出來。
圖5 Sysmex XE-2100 的幼稚細(xì)胞通道和有核紅細(xì)胞通道散點(diǎn)圖
該儀器在紅細(xì)胞和血小板的計(jì)數(shù)和分析上仍然沿用了經(jīng)典的電阻抗方法,在血紅蛋白測定上采用了無劇毒物質(zhì)的SLS溶血?jiǎng)┍壬ā?/p>
3 激光散射和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)
最早采用該技術(shù)的是Technicon公司的H1,H3型,現(xiàn)在的最新型為西門子公司的Advia120型和2120型(2007年以前為Bayer公司產(chǎn)品)。他是一款開發(fā)比較早的高等級(jí)儀器,其在白細(xì)胞分類上采用了過氧化酶測定通道和嗜堿粒細(xì)胞測定通道。根據(jù)細(xì)胞化學(xué)染色的特性進(jìn)行白細(xì)胞分類。在紅細(xì)胞和血小板分析都采用了雙角度激光法。在儀器的管路、電磁閥門、反應(yīng)杯上采用了獨(dú)特設(shè)計(jì)的集成液流版管路系統(tǒng),是目前血細(xì)胞分析儀中所獨(dú)有和特有的技術(shù)。
集成液流板實(shí)際上是將各種管路和電磁閥門、反應(yīng)杯等血球計(jì)數(shù)儀的常用硬件進(jìn)行綜合處理,系統(tǒng)化,微小化,透明化和集成化。形成的集成板被放置在儀器的明顯部位,方便觀察,并具一定的美觀效果。其另一特點(diǎn)則是細(xì)小的管路和反應(yīng)杯可是標(biāo)本和試劑用量明顯減少。
圖6 Advia 120的集成液流板。
在白細(xì)胞分類上,該儀器采用兩個(gè)通道進(jìn)行,一個(gè)為過氧化酶檢測通道,另一個(gè)為嗜堿細(xì)胞檢測通道。
過氧化酶反應(yīng)(peroxidase,POX)是血涂片染色的一個(gè)常用細(xì)胞化學(xué)染色方法,用于鑒別原始細(xì)胞與成熟的粒細(xì)胞,鑒別粒細(xì)胞與非粒細(xì)胞。染色后的細(xì)胞內(nèi)無藍(lán)黑色顆粒出現(xiàn)為陰性反應(yīng),出現(xiàn)細(xì)小顆粒或稀疏樣分布的黑色顆粒為弱陽性反應(yīng),出現(xiàn)黑色粗大而密集的顆粒為強(qiáng)陽性反應(yīng)。過氧化物酶主要存在于粒細(xì)胞系和單核細(xì)胞系中,各類白細(xì)胞對(duì)過氧化物酶的反應(yīng)是這樣的:早期的原始粒細(xì)胞為陰性,早幼粒以后的各階段都含有過氧化物酶,并隨著細(xì)胞的成熟過氧化酶含量逐漸增強(qiáng),中性分葉核粒細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng),嗜酸性粒細(xì)胞具有最強(qiáng)的過氧化物酶反應(yīng),嗜堿粒細(xì)胞不含此酶呈陰性反應(yīng)。在單核細(xì)胞系統(tǒng),除早期原始階段外,幼稚單核和單核細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)較弱的過氧化物酶反應(yīng)。淋巴細(xì)胞、幼稚紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞等都為過氧化物酶陰性反應(yīng)。Advia 120/2120血細(xì)胞分析儀的過氧化酶(Perox)檢測通道就是根據(jù)這個(gè)原理設(shè)計(jì)的,它檢測每一個(gè)通過流動(dòng)計(jì)數(shù)池中的白細(xì)胞,經(jīng)過激光照射所產(chǎn)生的過氧化酶散射光吸收率,來當(dāng)然試劑和輔助試劑均進(jìn)行了改良。
在Perox通道所產(chǎn)生的散點(diǎn)圖,橫軸表示在5°-15°激光散射獲得的細(xì)胞過氧化物酶含量情況,縱軸是低角度散射光測量的細(xì)胞體積大小。在此通道內(nèi)細(xì)胞被分為五類。1)過氧化酶最強(qiáng)陽性的嗜酸性粒細(xì)胞;2)過氧化酶強(qiáng)陽性的嗜中性分葉核粒細(xì)胞;3)體積較大、過氧化酶弱陽性的單核細(xì)胞;4)體積較小、過氧化物酶陰性的淋巴細(xì)胞;5)體積大于淋巴細(xì)胞且過氧化物酶陰性的未染色大細(xì)胞,此類細(xì)胞增加提示幼稚或原始的各類細(xì)胞可能出現(xiàn)。
在嗜堿細(xì)胞(Baso)通道中采用的檢測原理是:專用的嗜堿細(xì)胞試劑(Baso)將除了嗜堿細(xì)胞以外的白細(xì)胞除去細(xì)胞膜,使其裸核化并體積變小,僅將嗜堿性粒細(xì)胞保持原有狀態(tài),體積明顯大于其他類的白細(xì)胞。在散點(diǎn)圖上處于上面區(qū)域的為嗜堿性粒細(xì)胞;散點(diǎn)圖的橫坐標(biāo)可表示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性,處于左側(cè)的為單個(gè)核的細(xì)胞群,包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞;處于右側(cè)的為分葉核細(xì)胞;中間部位則考慮為桿狀核細(xì)胞;左下端為單個(gè)核的原始細(xì)胞區(qū)。
圖7:ADVIA 120/2120儀器Perox通道和Baso通道散點(diǎn)圖
該儀器在紅細(xì)胞、血小板的測定上也采用了光學(xué)檢測技術(shù)。通過激光照射掃描每個(gè)通過Flowcell的紅細(xì)胞,低角度散射光(2 °~3 °)用于測量細(xì)胞體積;高角度(5°~15°)散射光測量每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白濃度(CH)和血紅蛋白含量平均值CHCM。這兩個(gè)值不受紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白測定的影響。還可根據(jù)每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白濃度,計(jì)算出紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白分布寬度(HDW)值。其根據(jù)紅細(xì)胞在體積大小和單個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量的分析,將紅細(xì)胞劃分為9個(gè)區(qū)域,得到紅細(xì)胞體積和色素含量分布的九分圖,也是該儀器在紅細(xì)胞分析方面獨(dú)有的特色,根據(jù)紅細(xì)胞分布情況可初步判斷疾病類別(下圖中)。在血小板計(jì)數(shù)分析上也同樣采用了二維光散射分析法,即可獲得血小板體積大小,可測量1~60fl內(nèi)的各種大小不同的血小板,還可對(duì)血小板內(nèi)容物含量(MPC)進(jìn)行測定。血紅蛋白測定采用連續(xù)流動(dòng)比色法和紅細(xì)胞散射光直接測定法兩種方法,有助于高脂血和高膽紅素血標(biāo)本的血紅蛋白測定準(zhǔn)確性。
圖8:ADVIA 120/2120 紅細(xì)胞散點(diǎn)圖
4 雙鞘流技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色法
ABX是法國生成血細(xì)胞分析儀器的著名廠家,其生產(chǎn)的全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀Pentra 120型為其高端產(chǎn)品。在白細(xì)胞分類上采用該公司特有的專利技術(shù)-雙鞘流(DHSS)分析法。雙鞘流是專利技術(shù),而測定本身是通過電阻抗和光吸收法雙重原理。標(biāo)本首先在第一鞘流液中經(jīng)過電阻抗測定分析,得到細(xì)胞體積測定結(jié)果,然后通過第二鞘流引導(dǎo)再行光吸收率分析,對(duì)細(xì)胞內(nèi)容物進(jìn)行測定,最終將細(xì)胞測定信息在散射圖相應(yīng)的位置表現(xiàn)出來。雙鞘流技術(shù)的核心部件是含有紅寶石小孔的復(fù)雜的鞘流池,在雙鞘流系統(tǒng)的上下兩端分別加上恒定電流,是保證電阻法的測量要素。為了保證被檢測的細(xì)胞能夠正確通過計(jì)數(shù)孔和鞘流通道,需要利用外來鞘流來進(jìn)行矯正,因此通過左側(cè)鞘流泵注入稀釋液形成第一鞘流液,其作用是保護(hù)溶液能夠直接通過計(jì)數(shù)小孔,并且保證其中攜帶的細(xì)胞處于中心部位,液流不發(fā)生偏移和扭曲;溶液通過計(jì)數(shù)小孔后,再通過中間鞘流泵注入稀釋液形成第二股鞘流,用以保證吸光度測量。這樣的過程被稱為雙鞘流分析技術(shù)。
圖9 雙鞘流技術(shù)示意圖
儀器通過兩個(gè)通道來完成白細(xì)胞的五項(xiàng)分類。其采用的細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)(Cytochemistry)的原理是經(jīng)典的細(xì)胞分類技術(shù),此染色劑中含有溶血素及氯唑黑活體染料(Chlorazol Black E)。在儀器的LMNE檢測池中,全血樣品與染色劑充分混勻,在35℃條件下進(jìn)行孵育,此過程的作用是:① 溶解紅細(xì)胞 ②對(duì)單核細(xì)胞的初級(jí)顆粒、嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的特異顆粒進(jìn)行不同程度的染色,同時(shí)對(duì)細(xì)胞的膜(細(xì)胞膜、核膜、顆粒膜)也進(jìn)行不同程度的著色 ③ 固定細(xì)胞的形態(tài),使其保持自然狀態(tài)。由于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞對(duì)染色劑的著色程度不同、每種細(xì)胞特定的細(xì)胞核形態(tài)和顆粒的結(jié)構(gòu)造成光散射的強(qiáng)度不同,產(chǎn)生了特定的吸光率。
染色后的標(biāo)本被引導(dǎo)進(jìn)入鞘流池進(jìn)行雙鞘流分析,首先經(jīng)過60mm紅寶石小孔進(jìn)行電阻法分析,用于判斷細(xì)胞體積大小,在LMNE散點(diǎn)圖上的橫坐標(biāo)即可表示出細(xì)胞大小的特性。然后樣本迅速進(jìn)入直徑為42mm的第二鞘流檢測通道進(jìn)行光吸收率測定,以判斷細(xì)胞形態(tài)和內(nèi)容物等情況。根據(jù)每類細(xì)胞在這兩個(gè)分析參數(shù)上所表現(xiàn)出來的特性,形成二維分布的散點(diǎn)圖。在此通道內(nèi)可完成白細(xì)胞中淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸細(xì)胞群的分類。此通道內(nèi)在分析的同時(shí)還能夠檢測兩群異常白細(xì)胞亞群:巨大未成熟細(xì)胞(LIC)百分比及絕對(duì)值,異型淋巴細(xì)胞(ALY)百分比及絕對(duì)值,同時(shí)還可提供多達(dá)82種提示和報(bào)警信息。
在LMNE散點(diǎn)圖上,各類白細(xì)胞的特點(diǎn)是:①淋巴細(xì)胞:典型的淋巴細(xì)胞體積較小、形態(tài)規(guī)則、胞漿內(nèi)沒有顆粒,其吸光率最低,所以定位在散點(diǎn)圖的右下部矩陣中,正常淋巴細(xì)胞散點(diǎn)圖為正態(tài)體積分布。②單核細(xì)胞:典型的單核細(xì)胞體積較大、腎狀核、胞漿內(nèi)有初級(jí)顆粒(幾乎不著色),細(xì)胞核大且不分葉,光散射較少,所以位于吸光率軸的最下端,依據(jù)單核細(xì)胞的體積,位于體積軸的最右端,而異常單核細(xì)胞及特大單核細(xì)胞則可能出現(xiàn)在LIC的矩陣中。③中性粒細(xì)胞:典型的中性粒細(xì)胞具有嗜中性顆粒及分葉核的結(jié)構(gòu),中性顆粒部分著色,同時(shí)由于顆粒及核的分葉等形態(tài)上的復(fù)雜性,而產(chǎn)生光散射。所以中性粒細(xì)胞群散點(diǎn)圖位于中部。核分葉越多的中性粒細(xì)胞,吸光性越強(qiáng),在散點(diǎn)圖上的位置向右移。同時(shí)桿狀細(xì)胞(Bands)體積與中性粒細(xì)胞接近,但核的復(fù)雜程度低,吸光率低,散點(diǎn)圖位于中性粒細(xì)胞與單核細(xì)胞之間。④嗜酸性粒細(xì)胞:由于嗜酸性粒細(xì)胞含有特異性顆粒,與染色液特異性著色,其著色強(qiáng)度最深,位于Y-軸的最上端,此方法提高了嗜酸性粒細(xì)胞的分類的準(zhǔn)確性。⑤巨大未成熟細(xì)胞(Large Immature Cell):未成熟粒細(xì)胞因其體積較大,可含有顆粒,光散射強(qiáng),位于嗜中性粒細(xì)胞散點(diǎn)圖的右側(cè),在LIC矩陣圖中從左到右依次排列晚幼粒、中幼粒、早幼粒細(xì)胞,另外各種原始細(xì)胞位于單核細(xì)胞的右側(cè)區(qū)域中。由于此散點(diǎn)圖中可能有大單核細(xì)胞,可引起LIC假性計(jì)數(shù)增加(LIC的計(jì)數(shù)結(jié)果被計(jì)算到在嗜中性粒細(xì)胞中)。LIC包括:大單核細(xì)胞、高嗜堿性的單核細(xì)胞、巨大中性粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞、原始細(xì)胞。⑥異型淋巴細(xì)胞(Atypical Lymphs):在散點(diǎn)圖中位于淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞之間的一群細(xì)胞,包括:小原始粒細(xì)胞、大淋巴細(xì)胞等。
在WBC/BASO檢測池中,全血樣品與BasolyseII(PH2.4)溶血素混合,在35°C恒溫下,溶解紅細(xì)胞,由于嗜堿性粒細(xì)胞具有抗酸性,能夠保持形態(tài)完整,而其他白細(xì)胞胞漿溢出,成為裸核狀態(tài)。細(xì)胞通過一個(gè)直徑為80mm的鞘流微孔時(shí),根據(jù)電阻抗原理進(jìn)行測定,以細(xì)胞體積大小為橫坐標(biāo)繪制WBC/BASO直方圖。依據(jù)閾值設(shè)定區(qū)分裸核化的白細(xì)胞與嗜堿性粒細(xì)胞。在直方圖上可以看出在中心界標(biāo)左側(cè)的是細(xì)胞體積變小的其它細(xì)胞群,界標(biāo)右側(cè)是體積較大的嗜堿性粒細(xì)胞。因嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量極少,因此在直方圖上基本見不到明顯分布曲線和峰。
圖10 ABX血細(xì)胞分析儀LMNE散點(diǎn)圖和BASO直方圖
紅細(xì)胞和血小板仍然采用電阻抗原理測定,血紅蛋白采用比色法。此為在軟件系統(tǒng)中采用了浮動(dòng)界標(biāo)技術(shù)用于血小板計(jì)數(shù)及嗜堿細(xì)胞計(jì)數(shù),直方圖的界標(biāo)會(huì)依據(jù)細(xì)胞群的變化做出相應(yīng)的自動(dòng)調(diào)整。血小板計(jì)數(shù)上還采用了防返流裝置,目的為防止渦流現(xiàn)象對(duì)血小板計(jì)數(shù)產(chǎn)生影響。在白細(xì)胞計(jì)數(shù)過程中還采用了白細(xì)胞平衡檢測原理(WBC Count Balance),使得白細(xì)胞計(jì)數(shù)在WBC/HGB通道中與LMNE雙鞘流池計(jì)數(shù)結(jié)果相聯(lián)系,如果出現(xiàn)較大差別則可進(jìn)行報(bào)警提示。
最近該廠推出新一代ABX Pentra DX120型血細(xì)胞分析儀,其測定原理仍然采用雙鞘流技術(shù)。采用新技術(shù)擴(kuò)展了散點(diǎn)圖分布范圍,形成可對(duì)血液中未成熟的粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞共20個(gè)參數(shù)的分類或提示性報(bào)告信息,這對(duì)異常血細(xì)胞的篩檢提供了很大幫助。
圖11 Pentra DX120型幼稚細(xì)胞散點(diǎn)圖
5 多角度偏振光激光散射技術(shù)
美國雅培公司(ABBOTT)推出的血細(xì)胞分析儀,在白細(xì)胞分類中采用獨(dú)特的多角度偏振光散射(MAPSS)技術(shù),其所生產(chǎn)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀從CELL-DYN 3000,3200,3500,3700,4000,以及Sapphire(藍(lán)寶石),在白細(xì)胞分類上均采用了MAPSS技術(shù)。該技術(shù)基本原理是細(xì)胞在激光束的照射下,在多個(gè)角度都產(chǎn)生散射光,儀器在四個(gè)角度的四個(gè)檢測器將接收到的相應(yīng)的散射光信號(hào),然后經(jīng)過微處理器分析處理,將各類細(xì)胞安置在散點(diǎn)圖上的相應(yīng)位置,并計(jì)算出白細(xì)胞分類結(jié)果。
多角度偏振光散射白細(xì)胞分類技術(shù)(Multi—Angle Polatised Scatter Separation of white cell,MAPSS)其原理是一定體積的全血標(biāo)本用鞘流液按適當(dāng)比例稀釋。其白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài),因嗜堿性粒細(xì)胞顆粒具有吸濕的特性,所以嗜堿性粒細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)部的滲透壓高于鞘液滲透壓而發(fā)生改變,紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白從細(xì)胞內(nèi)游離出來,而鞘液內(nèi)的水分進(jìn)入紅細(xì)胞中,細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)仍然完整,但此時(shí)的紅細(xì)胞折光指數(shù)與鞘液的相同,故紅細(xì)胞不干擾白細(xì)胞檢測。在鞘流系統(tǒng)的作用下,樣本被集中為一個(gè)直徑30μm的小股液流,該液流將稀釋的血細(xì)胞單個(gè)排列,然后通過激光束,激光照射于細(xì)胞上,在各個(gè)方向都有其散射光出現(xiàn)。0°為前向角散射(1°~3°)光,可粗略地測定細(xì)胞大??;②10°為狹角散射光(7°~11°),可測細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其復(fù)雜性的相對(duì)特征;③90°為消偏振光散射(70°`~110°),基于顆??梢詫⒋怪苯嵌鹊钠窦す庀竦奶匦?,將嗜酸細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來。④90°垂直光散射(70°~110°),主要對(duì)細(xì)胞內(nèi)部顆粒和細(xì)胞成分進(jìn)行測量。這四個(gè)角度同時(shí)對(duì)單個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行測量和分析后,即可將白細(xì)胞劃分為嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞5種。ABBOTT的五分類法定量很有意思,不用傳統(tǒng)的體積定量,而是采用數(shù)量定量,每次計(jì)數(shù)時(shí)完成10000個(gè)細(xì)胞測定即停止。
圖12 MAPSS測定原理示意圖
該類型儀器除了基本的白細(xì)胞五分類外,還提供了其它異常白細(xì)胞的信息和報(bào)警,提供給檢驗(yàn)者參考,以通過人工顯微鏡檢查復(fù)核這些結(jié)果,例如異常淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、桿狀核中性粒細(xì)胞。
圖13 ABBOTT CELL-DYN五分類血細(xì)胞分析儀各類白細(xì)胞在散射圖上的分布圖
6 激光散射技術(shù)
日本光電公司是開發(fā)和生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家之一,目前所知僅有兩款類型的儀器投入市場,均采用相同的測定原理,型號(hào)是MEK-7222和MEK-8222。其WBC、RBC和PLT計(jì)數(shù)原理采用電阻法,白細(xì)胞分類測定采用鞘流技術(shù)和激光散射原理。在鞘流液中白細(xì)胞通過管路進(jìn)入鞘流池內(nèi),激光照射白細(xì)胞后發(fā)生的各種散射光,根據(jù)血細(xì)胞的體積、血細(xì)胞的復(fù)雜性(有無顆粒、核的構(gòu)造等)的不同,散射光的強(qiáng)度和方向有所不同。激光直進(jìn)方向和同方向小角度的散射光(表示Size)、激光直進(jìn)方向和同方向大角度的散射光(表示Complexity)、與激光直進(jìn)方向相對(duì)垂直的方向的散射光(表示Granularity)為參數(shù)的作為散點(diǎn)圖,對(duì)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞進(jìn)行分類。Size表示血細(xì)胞的大小、Complexity表示白細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)雜度、Granularity表示白細(xì)胞顆粒的程度。采用此原理可提供了三個(gè)散射圖,MAIN散點(diǎn)圖、 NE-EO散點(diǎn)圖 和MO-BA散點(diǎn)圖。在MAIN散點(diǎn)圖上(大圖部分)下面散點(diǎn)表示淋巴細(xì)胞群,右側(cè)為粒細(xì)胞群;兩個(gè)小圖,NE-EO為中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞散點(diǎn)圖,MO-BA為單核細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞細(xì)胞散點(diǎn)圖。此外儀器還能給出大的不成熟細(xì)胞(LIC)提示信息。
圖14 日本光電MEK7222型五分類血細(xì)胞分析儀散點(diǎn)圖
7 邁瑞激光散射和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)
邁瑞(MINDRAY)公司是國內(nèi)最早有能力生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家,他們目前生產(chǎn)有三種型號(hào)的五分類血細(xì)胞分析儀。BC-5500,BC5380和BC5300型自動(dòng)五分類血液細(xì)胞分析儀,采用半導(dǎo)體激光散射技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù),配合改良的流式分析裝置對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行精確的五分類分析。BC-5500型為目前最高配置,可選擇使用靜脈血或預(yù)稀釋末梢血,均能獲得良好的各種細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果和白細(xì)胞五分類結(jié)果??商峁?7項(xiàng)計(jì)數(shù)和計(jì)算參數(shù)、2個(gè)散點(diǎn)圖和2個(gè)直方圖以及異常報(bào)警信息。測定速度為80個(gè)標(biāo)本/小時(shí)(配自動(dòng)進(jìn)樣器),全中文的操作界面,操作及提示功能一目了然,具有大型彩色TFT觸摸屏,操作簡單方便。
鞘流技術(shù)是所有高檔血細(xì)胞分析儀均采用的細(xì)胞進(jìn)樣技術(shù),為了達(dá)到更高的液流速度壓力差和更穩(wěn)定的液體流動(dòng),該公司獨(dú)創(chuàng)性地采用了二次加速鞘流技術(shù),分級(jí)實(shí)現(xiàn)鞘液的第二次加速,增加了單位時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的通過流量,從而能夠完成對(duì)預(yù)稀釋血液進(jìn)行白細(xì)胞五分類分析。
儀器通過兩個(gè)通道完成白細(xì)胞分類測定。在DIFF通道中增加了利用了可對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行染色的特殊試劑。激光散射分析技術(shù)是五分類法常用的分析技術(shù),由于細(xì)胞的物理特性,當(dāng)激光照射到細(xì)胞時(shí),會(huì)有不同角度的散射光出現(xiàn)。低角度(1°~5°)散射光可反映細(xì)胞體積大小信息;中高角度(10°~20°)散射光可反映細(xì)胞顆粒的復(fù)雜性信息。綜合這兩個(gè)角度散射光的信息,結(jié)合其他特殊技術(shù)來完成白細(xì)胞的五分類測定。標(biāo)本在鞘流的帶動(dòng)下進(jìn)入儀器的檢測區(qū)域后,激光照射于細(xì)胞之上所發(fā)射出的低角度和中高角度散射光信號(hào)可表現(xiàn)出細(xì)胞大小和內(nèi)容物復(fù)雜程度(包括細(xì)胞內(nèi)顆粒等)的特性信息,經(jīng)儀器檢測分析,將其分布在一個(gè)二維空間的散點(diǎn)圖中,可區(qū)分淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞。而化學(xué)染色技術(shù)可進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞的準(zhǔn)確判定。
在WBC/BASO通道中通過強(qiáng)溶型試劑和特異性染色技術(shù),可保留完整的嗜堿性粒細(xì)胞,并對(duì)其進(jìn)行特異性修飾,同時(shí)破壞其它四類白細(xì)胞,使之形成膜包核狀態(tài),在激光的照射下同樣形成兩個(gè)角度的散射光,完整的嗜堿性粒細(xì)胞體積偏大,其他類別白細(xì)胞體積變小,通過激光信號(hào)的強(qiáng)弱來計(jì)數(shù)嗜堿性粒細(xì)胞并在該通道中計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)。該方法可以有效排除難溶性紅細(xì)胞、巨大血小板、血小板聚集及其它非細(xì)胞顆粒等因素對(duì)計(jì)數(shù)的影響,保證嗜堿性粒細(xì)胞及WBC總數(shù)的精確分類和計(jì)數(shù)。
圖15 邁瑞五分類血細(xì)胞分析儀散點(diǎn)圖特征
三 圖像分析法白細(xì)胞分類儀器
文章開始部分已經(jīng)提到在1982年日本日立公司生產(chǎn)的8200型白細(xì)胞圖像分析系統(tǒng),應(yīng)該是此類儀器的原始機(jī)型。而作者在1984年也曾經(jīng)參與過中科院某研究所的一個(gè)關(guān)于血細(xì)胞形態(tài)特征數(shù)字化的研究工作,其目的是將5類白細(xì)胞基本信息在顯微鏡下掃描后形成數(shù)據(jù)模型,可惜這項(xiàng)工作因?yàn)楫?dāng)時(shí)技術(shù)條件的限制而沒有取得預(yù)想的結(jié)果。
近年來瑞典CellaVision AB公司開發(fā)出一種新型自動(dòng)影像血細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)CellaVision已經(jīng)投入臨床應(yīng)用,該產(chǎn)品2005年3月在歐洲開始投放市場,已經(jīng)有許多實(shí)驗(yàn)室配備了該系統(tǒng),用于進(jìn)行血涂片的過篩檢查,該產(chǎn)品2007年進(jìn)入中國市場,正處于推廣中。該系統(tǒng)目前有兩款機(jī)型,CellaVision DM96和CellaVision DM8。該系統(tǒng)是以染色后的血涂片為標(biāo)本,以最接近傳統(tǒng)顯微鏡觀察法的技術(shù)對(duì)血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞進(jìn)行初步分類的儀器,該儀器采用先進(jìn)的人工智能神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)和全自動(dòng)的操作程序,可使血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)在自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、智能化方面達(dá)到一定的目的和水準(zhǔn),在強(qiáng)調(diào)形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)重要性的背景下有良好的發(fā)展前景。
圖 16 檢驗(yàn)醫(yī)師在Cellavision顯示屏前審查白細(xì)胞分類結(jié)果
該儀器的組成可分為五大部分
1 血片自動(dòng)傳輸系統(tǒng) 將染色后的標(biāo)準(zhǔn)血涂片放在片盒內(nèi)。該系統(tǒng)不具染色功能,需先將血片用瑞氏或瑞氏-姬姆薩染液染色。血片可按照順序被儀器傳輸系統(tǒng)傳送到顯微鏡載物臺(tái)上。
2 血片自動(dòng)傳輸系統(tǒng) 將血片從片盒內(nèi)取出并通過掃描條碼記錄標(biāo)本編號(hào),然后將標(biāo)本送到自動(dòng)顯微鏡的載物臺(tái)上。
3 自動(dòng)加油系統(tǒng) 自動(dòng)吸取適量的顯微鏡油,滴加到血涂片適當(dāng)?shù)奈恢?,用于油鏡頭下的細(xì)胞觀察和分類。其感應(yīng)器能提示加油的狀態(tài)和加油的量。
4 自動(dòng)血涂片掃描系統(tǒng) 包括一臺(tái)具有物鏡頭自動(dòng)轉(zhuǎn)換、血涂片可三維方向移動(dòng)的自動(dòng)顯微鏡和一臺(tái)具有自動(dòng)調(diào)焦能力的數(shù)碼照相機(jī)。物鏡頭可根據(jù)要求自動(dòng)轉(zhuǎn)換×10、×40、×100倍鏡頭;載物臺(tái)可水平上下左右移動(dòng),并可按照Z字型路線移動(dòng)血片,供照相機(jī)攝取不同部位的細(xì)胞形態(tài)圖像。
5 數(shù)據(jù)光電轉(zhuǎn)換系統(tǒng) 數(shù)碼相機(jī)拍攝后的數(shù)字圖像信息,將光學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)變成數(shù)字信號(hào),然后對(duì)每個(gè)視野下的圖像進(jìn)行分析,辨識(shí)單細(xì)胞層,白細(xì)胞定位點(diǎn),從而為軟件系統(tǒng)的白細(xì)胞分類提供源數(shù)據(jù)。
儀器分析原理:首先在×10倍物鏡頭下搜索單細(xì)胞層,轉(zhuǎn)換×40倍物鏡頭后拍攝紅細(xì)胞圖像,再轉(zhuǎn)換×100倍油鏡頭后,在鏡油加入后,在單細(xì)胞層掃描拍攝有核的白細(xì)胞,其所搜尋拍攝的白細(xì)胞數(shù)量可自行定義。獲得細(xì)胞數(shù)碼圖像后,通過軟件系統(tǒng)提取細(xì)胞特征,例如紅細(xì)胞,需提取紅細(xì)胞直徑、顏色、色素含量、對(duì)比度等特征性信息;白細(xì)胞需提取白細(xì)胞形狀、大小、紋理、顏色、空隙、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)比例關(guān)系等360個(gè)信息參數(shù)。將所提取的特征信息轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào),然后通過人工智能神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)(ANN)進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。這種人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)是根據(jù)大型細(xì)胞數(shù)據(jù)庫進(jìn)行制作的。
圖17 Cellavision拍攝的中性粒細(xì)胞圖片
圖18 Cellavision拍攝的中性桿狀核粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和幼稚細(xì)胞圖片
儀器顯示屏上可提供白細(xì)胞分類的結(jié)果和分割成單細(xì)胞的圖片,在一般情況下操作者只需要確認(rèn)分類結(jié)果,以及側(cè)重于那些處于邊緣的細(xì)胞分類即可。對(duì)儀器不能確認(rèn)的細(xì)胞,可通過屏幕調(diào)出,放大觀察,再確認(rèn)類別。操作者還可建立自己的參考細(xì)胞圖庫,并可對(duì)細(xì)胞形態(tài)和報(bào)告添加備注。系統(tǒng)還可與血細(xì)胞分析儀連接,獲取血細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果,形成血細(xì)胞自動(dòng)化分析 形態(tài)學(xué)報(bào)告的更加完美的結(jié)果。該系統(tǒng)可給出白細(xì)胞17個(gè)類別,除了五分類結(jié)果外,還有早幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞、原始細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞等類別;紅細(xì)胞分析上可得到大小不均、小型紅細(xì)胞、巨紅細(xì)胞、低色素紅細(xì)胞、多色性紅細(xì)胞、異型紅細(xì)胞等信息;在血小板上可觀察到血小板聚集情況,以及根據(jù)圖像中血小板數(shù)量判斷核實(shí)血小板數(shù)量,與血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)的血小板數(shù)量相互比對(duì)核實(shí)??尚纬蓭в邪准?xì)胞分類圖的結(jié)果報(bào)告。
儀器涂片和染色可通過手工方式操作,但需要較好的技術(shù)水平,薄血片,并有一定數(shù)量的單細(xì)胞層,染色顏色保持穩(wěn)定。也可配置自動(dòng)涂片和自動(dòng)染色機(jī)完成血涂片的前期預(yù)備性工作。該儀器可與全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測定數(shù)據(jù)進(jìn)行連接,可以將具有形態(tài)學(xué)特點(diǎn)的分類結(jié)果與儀器分析結(jié)果進(jìn)行合并,得到更加可靠的血細(xì)胞分析數(shù)據(jù)。
小結(jié):本文從全自動(dòng)五分類式血細(xì)胞分析儀談起,主要介紹各種品牌和代表類型的儀器在白細(xì)胞分析和分類上的不同原理和散點(diǎn)圖特征,這些儀器應(yīng)該是目前國內(nèi)在應(yīng)用五分類血細(xì)胞分析儀上有代表性的儀器。文中材料來自教材、圖書、文獻(xiàn)報(bào)道和廠家宣傳資料。如有不妥或錯(cuò)誤請(qǐng)大家指正。