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【兆恒機(jī)械】生化儀器之試劑存在的問(wèn)題及解決辦法

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  • 添加日期:2021年07月19日


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全自動(dòng)生化分析儀試劑存在的問(wèn)題及解決辦法:


1  優(yōu)質(zhì)的儀器用水

優(yōu)質(zhì)的儀器用水是使用好檢驗(yàn)試劑的一個(gè)十分重要的環(huán)節(jié)之一。因?yàn)闇y(cè)定離子類項(xiàng)目:比如銅、鐵、鋅、鈣、鎂、磷。

這些項(xiàng)目在使用過(guò)程中,儀器用水的質(zhì)量相當(dāng)重要,雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都有制水系統(tǒng),但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水,離子交換樹(shù)脂在使用一段時(shí)間后交換能力明顯下降,需要定期進(jìn)行更換,否則制備的水離子含量多,電導(dǎo)率偏高。使用含離子超標(biāo)的水沖洗儀器,直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項(xiàng)目,如果水質(zhì)不好,儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高,則檢驗(yàn)該項(xiàng)目的結(jié)果也會(huì)受到嚴(yán)重的影響。還有如果血清中含有GLDH(谷氨酸脫氫酶,而儀器使用水存在氨時(shí),可消耗NADH,使利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)檢測(cè)法結(jié)果偏高。解決辦法:定期檢測(cè)水質(zhì),當(dāng)儀器用水的電阻小于1.0MQ時(shí)需要更換離子交換樹(shù)脂或活性炭。


2  標(biāo)本的及時(shí)分離及測(cè)定

標(biāo)本的及時(shí)分離和測(cè)定是用好檢驗(yàn)試劑的首要環(huán)節(jié),因?yàn)榉彩抢?/span>NADH轉(zhuǎn)化為NAD變化率來(lái)檢測(cè)其物質(zhì)含量的試驗(yàn)都或多或少受到血液存放時(shí)間的影響,原因是全血放時(shí)間越長(zhǎng)紅細(xì)胞利用血清中的糖進(jìn)行無(wú)氧酵解產(chǎn)生的丙酮酸,丙酮酸使NADH轉(zhuǎn)化為NAD,這樣使用測(cè)定結(jié)果假性升高。解決辦法:a、作好與臨床的溝通。對(duì)抽血人員和標(biāo)本運(yùn)送人員進(jìn)行培訓(xùn);b、及時(shí)分離血清并及時(shí)檢測(cè);c、也可將全自動(dòng)生化分析儀上的延遲時(shí)間設(shè)置大于60秒,這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮酸的干擾,可安全避免假陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)。


3  交叉污染

3.1生化分析儀本身的清洗問(wèn)題造成的交叉污染使用

全自動(dòng)生化分析儀時(shí),儀器的交叉污染現(xiàn)象是引起實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏離的一個(gè)原因。由于全自動(dòng)生化分析儀試劑針需要解除各種試劑,一般難以徹底清洗干凈,所以容易造成分析項(xiàng)目的攜帶污染。而生化項(xiàng)目的測(cè)定往往需要僅幾微升樣本,試劑往往需要幾百微升 ,尤其在沒(méi)有自動(dòng)清洗程序的流動(dòng)池式生化分析儀上,由于前帶現(xiàn)象的存在,如果前一個(gè)人標(biāo)本為高值樣本,則接后的第一個(gè)低值標(biāo)本結(jié)果應(yīng)慎重報(bào)告。不僅沒(méi)有沖洗程序的生化儀器上有這種現(xiàn)象,就是具有自動(dòng)清洗程序的全自動(dòng)生化分析儀也有交叉污染,例如Beckman 全自動(dòng)生化分析儀CX4,它的試劑針(probe)、樣品吸樣針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗洗液沖洗,然后用高壓壓縮空氣吹干,有時(shí)由于洗液壓力和壓縮空氣壓力偏低,使試劑吸針、樣品針及反應(yīng)攪拌棒沖洗不干凈、吹不干,從而導(dǎo)致反應(yīng)池之間相互污染、試劑間交叉污染,是檢驗(yàn)結(jié)果偏離。另一個(gè)值得注意的問(wèn)題是許多生化儀器由于長(zhǎng)期頻繁的利用,使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的“特氟龍”吸頭不及時(shí)更換,使吸樣針或試劑針密封層增大,產(chǎn)生泄露現(xiàn)象也是造成樣本間及實(shí)際間項(xiàng)目污染的一個(gè)重要原因。試劑吸樣和樣品吸樣不準(zhǔn)確,通常導(dǎo)致利用速率法測(cè)試的標(biāo)本系統(tǒng)偏低或偏高。眾所周知,速率法計(jì)算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的,如果加樣體積或加試劑體積不準(zhǔn),導(dǎo)致真正速率法計(jì)算因子和理論計(jì)算因子偏離,從而使測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確。

解決辦法:a、定期進(jìn)行一期維護(hù)和保養(yǎng);b、按要求及時(shí)更換零部件;c;定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn);d;全自動(dòng)生化分析標(biāo)本和試劑用量少,殘存少量即會(huì)影響測(cè)試結(jié)果,每天應(yīng)用無(wú)水乙醇擦洗并定期更換干燥棒,保證比色杯清洗后不留賤液,避免比色杯的交叉污染。

3.2 檢驗(yàn)項(xiàng)目間的交叉污染

       在全自動(dòng)生化分析儀使用中,我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)項(xiàng)目會(huì)影響緊隨其后項(xiàng)目的測(cè)試結(jié)果,造成這種影響的原因之一是一種實(shí)際中含有另一試驗(yàn)的測(cè)定物質(zhì)而直接干擾其測(cè)試結(jié)果。比如:在TP試劑中含有大量的CUSO4,如果將Cu放在TP項(xiàng)目的后面檢測(cè),會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。再如P放在含有磷酸鹽的項(xiàng)目后面,TBA放在含有膽酸鹽的項(xiàng)目后面都會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。GLU放在CK和CK-MB的項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差,LDH放在ALT或者AST 的項(xiàng)目后面可能回使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Ca放在a-amy項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差,Mg試劑(calmagite法)中含有EGTA,會(huì)干擾Ca的測(cè)試結(jié)果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個(gè)項(xiàng)目的PH值相差較大或反應(yīng)對(duì)PH要求嚴(yán)格的項(xiàng)目,也會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響, TBA放在TP,ALB,UA,后邊測(cè)定,會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏低等等。解決辦法:a、調(diào)整試驗(yàn)的前后順序來(lái)消除這種影響;b、在造成污染的項(xiàng)目和受污染的項(xiàng)目之間設(shè)置清洗并設(shè)定清洗的次數(shù)。


4 正確的參數(shù)設(shè)置也是用好檢驗(yàn)試劑的另一個(gè)關(guān)鍵因素

   現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定,包括樣品量、試劑量、波長(zhǎng)、分析方式和延遲時(shí)間、測(cè)試時(shí)間的設(shè)定等。下面我們就延遲時(shí)間和加樣程序的設(shè)定來(lái)說(shuō)明正確使用分析參數(shù)對(duì)于正確運(yùn)用試劑的作用,比如肌酐苦味酸測(cè)定法,我們?cè)谠O(shè)定延遲時(shí)間應(yīng)注意到苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與乙酰乙酸等快速反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物,而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽(yáng)性干擾,解決辦法:最好設(shè)定延遲時(shí)間為50-60秒之間。測(cè)定時(shí)間少于60秒,這樣就能充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾,從而檢測(cè)到真正肌酐含量。


   5 校準(zhǔn)液的正確使用

由于目前生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液并非通用的,只使用于某一特定的分析系統(tǒng)。同一項(xiàng)目不同方法之間有很大差異,同一項(xiàng)目不同方法學(xué)的校準(zhǔn)液更不能混用,但是在臨床檢驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)發(fā)生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準(zhǔn)液校準(zhǔn),乳酸脫氫酶L-P法用P-L法校準(zhǔn)液校準(zhǔn),TBA循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)等都會(huì)造成測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。另外同一法方學(xué),不同廠家的校準(zhǔn)品和試劑都會(huì)有所差異,解決辦法:a、建議結(jié)合各實(shí)驗(yàn)室條件選擇適合自己實(shí)驗(yàn)室的校準(zhǔn)品,如果條件可進(jìn)行系統(tǒng)溯源;b、建立滿足同一方法學(xué)、同一測(cè)定條件、與理論計(jì)算的因子(FACTOR值差異不大,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素,方可進(jìn)行校正測(cè)定;c、建立一個(gè)可靠的參考系統(tǒng)作為校準(zhǔn)性基礎(chǔ),然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到“使用方法”測(cè)定中去,使“使用方法”測(cè)定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來(lái)。在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過(guò)程中,永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為試驗(yàn)對(duì)象。以方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)方法為驗(yàn)證手段,采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,斜率接近1,截距較小,說(shuō)明“使用方法”對(duì)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果非常接近,檢測(cè)結(jié)構(gòu)可靠。


   6 抗凝劑的使用

       目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA-K2、肝素、草氨酸鈉等,TBA和AFU不能使用肝素抗凝劑,因?yàn)楦嗡貢?huì)使TBA和AFU試劑發(fā)生混濁,導(dǎo)致吸光度假性偏高,從而使檢測(cè)結(jié)果偏高,解決辦法:a、認(rèn)真參閱試劑說(shuō)明書(shū)b、作好與抽血人員之間的溝通和培訓(xùn)使抽血人員知道什么項(xiàng)目用何種標(biāo)本。


7 混成單一試劑的問(wèn)題

   比如酶法肌酐試劑,第一步R1中的酶要消除樣品中內(nèi)源性肌酸的干擾,如果混成單一試劑,則會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高,消除法HDL、LDL也不能混成單一試劑,則會(huì)使測(cè)定的HDL和LDL不準(zhǔn)確。另外。有的試劑混成單一試劑后,穩(wěn)定性和抗干擾能力也會(huì)明顯下降。

   解決辦法:a、在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑;b、如一定要使用單試劑,最好選擇試劑廠家針對(duì)部份項(xiàng)目專門生產(chǎn)好的單試劑


8 試劑瓶的問(wèn)題

   隨著全自動(dòng)生化分析儀的普及,“開(kāi)瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視,但是就目前有的試劑方法學(xué)來(lái)講,還達(dá)不到人們所要求的試劑開(kāi)瓶后在儀器內(nèi)放很長(zhǎng)時(shí)間不需要定標(biāo),比如ALP、TP、GSP、等PH為堿性的試劑,開(kāi)瓶后試劑會(huì)吸收空氣中的二氧化碳,使試劑本身的PH值下降,如果長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)瓶不定標(biāo)或者校準(zhǔn),會(huì)使檢測(cè)結(jié)果發(fā)生偏離,在國(guó)外有的項(xiàng)目有明文規(guī)定,必須72小時(shí)之內(nèi)定標(biāo),比如BUN。但是在國(guó)內(nèi)的某些實(shí)驗(yàn)室為了方便,很長(zhǎng)時(shí)間都不作校準(zhǔn),導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的不準(zhǔn)確,解決辦法:a、了解試劑特性。及時(shí)對(duì)部份項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn),對(duì)于每天標(biāo)本量不多的醫(yī)院,可按照1-2天的用量取用試劑放入儀器。


9 不同批號(hào)試劑想混的問(wèn)題

   目前將不同批號(hào)的試劑混合在一起使用的想象在檢驗(yàn)中經(jīng)常發(fā)生,當(dāng)然這一方面是為了節(jié)省成本,另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、是什么試劑,由于不同批號(hào)的試劑生產(chǎn)時(shí)間不同,試劑中工具酶的活性會(huì)有差異,會(huì)發(fā)生水解的底物濃度隨時(shí)間長(zhǎng)短也會(huì)不同。因此混在一起使用而又不定標(biāo),可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。還有如果有的試劑開(kāi)瓶時(shí)間太長(zhǎng),空氣中的灰塵或細(xì)菌會(huì)進(jìn)入瓶?jī)?nèi),由于有的試劑含量有大量的蛋白質(zhì)和鹽,是細(xì)菌生產(chǎn)的最好條件。雖然有的試劑添加了防腐劑,單防腐劑的方法也有一定限度的,而且絕大多數(shù)廠家的試劑中是沒(méi)有加防腐劑的。

    解決辦法:a、不同批號(hào)試劑建議不要混用,如果混用最好重新定標(biāo)。B 試劑瓶在儀器內(nèi)使用時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng),及時(shí)更換。C、一般每個(gè)試劑瓶?jī)?nèi)由于試劑針不能吸完,或多或少都會(huì)留有幾毫升的試劑,如果是同一批號(hào)可以將未開(kāi)瓶的同一批號(hào)試劑往里倒。但如果不是同一批號(hào)的試劑時(shí)到如后最好重新定標(biāo),最好的做法是將每個(gè)批號(hào)的剩余試劑留起來(lái)待一定數(shù)量后混在一起,然后重新定標(biāo)后檢測(cè)