毛細(xì)管電泳(CE)基因分析儀平臺,你知道有哪些嗎?
1987年,賽默飛Applied Biosystems在Sanger測序原理的基礎(chǔ)上發(fā)布第一代真正商業(yè)化的自動測序儀。
1996年,推出310型全自動遺傳分析儀,實(shí)現(xiàn)全部操作自動化,包括自動灌膠、自動進(jìn)樣、自動數(shù)據(jù)收集分析等。也標(biāo)志著從平板膠進(jìn)入毛細(xì)管電泳時代。
隨后,伴隨著儀器的更新,通量逐漸提高,出現(xiàn)我們常見的3130系列、3730系列以及經(jīng)典的3500系列。其中3500Dx和3500xl Dx基因分析儀已獲得NMPA認(rèn)證。
站在巨人的肩膀上,2017年,推出最簡便、自動化程度最高的一款基因分析儀,它就是SeqStudio。
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經(jīng)過數(shù)十年結(jié)果的驗(yàn)證,Sanger測序是DNA測序的金標(biāo)準(zhǔn),此外,多重片段分析也是您廣泛應(yīng)用的遺傳分析技術(shù)。
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Sanger測序的工作流程從樣本制備到最終數(shù)據(jù)分析,包括PCR擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物純化、循環(huán)測序、測序反應(yīng)純化、毛細(xì)管電泳和數(shù)據(jù)分析。如圖,賽默飛提供Sanger測序全套解決方案。
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測序試劑盒可以根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行選擇,可參考如下的表格:
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* Recommended: ++
* Satisfactory: +
* Not recommended: -
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Sanger測序流程中,循環(huán)測序反應(yīng)時PCR產(chǎn)物的用量究竟要加多少?
不同長度的PCR片段對產(chǎn)物的需求量不一樣,一般可參考如下列表:
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POP4聚合物可實(shí)現(xiàn)快速反應(yīng),更適合于人類身份鑒定和片段分析。POP6聚合物是進(jìn)行長片段測序的理想選擇。當(dāng)和BigDye V1.1一起使用時,POP-6也可以用于測定非??拷?’端的堿基。POP-7聚合物介于POP-4和POP-6之間,他非常的靈活,適用于很多的應(yīng)用。
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一種是在引物5’端標(biāo)記熒光基團(tuán),另一種是用熒光標(biāo)記ddNTP。
5’端引物標(biāo)記通常用于微衛(wèi)星序列分析;熒光標(biāo)記ddNTP通常用于SNaPshot多重分析。
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片段分析實(shí)驗(yàn)常用的熒光染料組合有哪些?分別包含哪些熒光染料?
片段分析實(shí)驗(yàn)常用的熒光染料組合為G5和E5。
G5染料組合包括6-FAM、VIC、NED、PET和LIZ,通常用于微衛(wèi)星序列分析。
E5染料組合包括dR110、dR6G、dTAMRA、dROX和LIZ,主要用于SNaPshot 重分析。
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· 測序數(shù)據(jù).ab1文件建議用Sequence Analysis軟件進(jìn)行分析;
· 片段分析數(shù)據(jù).fsa文件建議用GeneMapper軟件進(jìn)行分析;
· 人類鑒定數(shù)據(jù).hid文件建議用GeneMapper ID-X軟件進(jìn)行分析