試劑空白:
試劑空白是指由于測(cè)試試劑本身而帶來的測(cè)試結(jié)果的微小的正誤差。由于生化測(cè)試測(cè)量的吸光度為相對(duì)吸光度,所以從理論上說,所有終點(diǎn)法的測(cè)試都需要把試劑本身的吸光度扣除。試劑本身的吸光度就是試劑空白。測(cè)量方法是按照正常測(cè)試的試劑和樣本量,把樣本換成蒸餾水來測(cè)量。
測(cè)試試劑的空白值對(duì)于一項(xiàng)測(cè)試尤為重要,當(dāng)進(jìn)行低濃度測(cè)定時(shí)應(yīng)該從測(cè)試結(jié)果中扣除測(cè)試試劑的空白值。例如,如果從0.06mg/L的低濃度測(cè)試結(jié)果中減掉0.02mg/L的試劑空白值,就會(huì)使最終測(cè)定結(jié)果改變至少30%。而從1.23mg/L的高濃度測(cè)試結(jié)果中減掉0.02mg/L的試劑空白值,最終測(cè)定結(jié)果只發(fā)生了2%的變化。
測(cè)定試劑的空白值時(shí),需要使用高質(zhì)量的去離子水代替待測(cè)樣品,加入測(cè)試試劑,按照操作步驟,進(jìn)行常規(guī)測(cè)試。然后,從樣品的測(cè)定結(jié)果中減去測(cè)試試劑的空白值。不同批次的測(cè)試試劑其空白值會(huì)有所變化,所以,當(dāng)使用不同批次的測(cè)試試劑時(shí),需要重新對(duì)它的空白值進(jìn)行測(cè)定。
在傳統(tǒng)手工方法中,每次測(cè)定都要做至少三個(gè)管:測(cè)定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管。其中空白管是試劑加蒸餾水,測(cè)出來也就是試劑空白。因?yàn)椴僮鳝h(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異,所以要求每次都要測(cè)定試劑空白,稱為實(shí)時(shí)試劑空白。
在全自動(dòng)分析儀上,大體上是模擬手工操作。但許多全自動(dòng)分析儀為追求速度,在設(shè)計(jì)上采用一些折中方法來測(cè)定試劑空白。有些全自動(dòng)分析儀是做不了實(shí)時(shí)試劑空白,因?yàn)樗鼈內(nèi)窍燃尤霕颖竞蠹釉噭?。為了折中,只好在定?biāo)時(shí)做一個(gè)試劑空白保存起來,需要扣除試劑空白時(shí)再減這個(gè)預(yù)先保存的值。這種做法,對(duì)于比較穩(wěn)定的試劑來講,對(duì)結(jié)果影響不大。
總的說來,自動(dòng)生化儀上的試劑空白一般表現(xiàn)為零點(diǎn)吸光度,該吸光度是通過校準(zhǔn)確立的。
樣本空白:
樣品空白是指在某項(xiàng)測(cè)試程序中,使用某個(gè)樣品的濃度作為儀器的零基準(zhǔn)。樣品空白可以抵消加入測(cè)試試劑前由于樣品自身存在的色度或濁度而引起的正誤差。由于溶血、脂血、黃疸等情況,會(huì)導(dǎo)致樣本本身的吸光度對(duì)測(cè)試結(jié)果造成影響。所以對(duì)樣本本身吸光度的測(cè)量,即樣本空白,可以去除這方面的影響。測(cè)量方法是按照正常測(cè)試的試劑和樣本量,把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進(jìn)行測(cè)量。自動(dòng)生化儀上,很難界定樣本空白。與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點(diǎn):
a).在雙試劑測(cè)定時(shí),加入試劑1和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白,所以有單試劑不能扣除樣本空白的說法。
b).現(xiàn)在優(yōu)質(zhì)的試劑的抗干擾能力都比較強(qiáng),比如有些雙試劑,R1加入后先和樣本孵育一段時(shí)間,將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應(yīng)掉,再加入R2開始測(cè)定反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白。
c).現(xiàn)代全自動(dòng)生化儀大多采用雙波長測(cè)定。雙波長測(cè)定的原則是根據(jù)干擾組分和待測(cè)物質(zhì)吸收光譜的峰形特征,選擇兩個(gè)波長和。使干擾組分在這兩個(gè)波長處的吸光系數(shù)相等,而使待測(cè)物質(zhì)在兩波長處的吸光系數(shù)有顯著差別。以兩波長分別測(cè)定分析溶液的吸光度,以兩個(gè)吸光度值之差(△A)計(jì)算。這也可以扣除一部分樣本空白。
d).有些儀器有專門的“血清信息”功能的設(shè)置。做法都是單獨(dú)占用一個(gè)空白通道來計(jì)算,這也叫做樣品空白校準(zhǔn)。
在使用樣品空白對(duì)測(cè)試儀器進(jìn)行調(diào)零后,只有樣品與測(cè)試試劑發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生的色度被測(cè)定了。由于樣品的背景色度和濁度往往各不相同,樣品空白經(jīng)常用來對(duì)儀器進(jìn)行調(diào)零。
試劑空白和樣品空白的空白概念區(qū)別要點(diǎn):**空白=只含**的空白(吸光度)
3、水空白:
比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意義主要是對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行檢查和校正,如光源,比色杯等,同時(shí)在計(jì)算中起到消除“杯差”的 作用。日立7060中的Cell Blank(杯空白)測(cè)定的就是水空白。